Antibiograma. Resistência de Cocos e Bacilos QUESTÕES PARA AS PROVAS; CONTEÚDO DAS AULAS; HORÁRIO DE ATENDIMENTO ON-LINE; blog do professor: http://chicoteixeira.wordpress.com

Introdução Na maioria dos casos é adequado solicitar um teste de difusão em disco ou com microdiluição em caldo de cultura para orientar a terapia clínica; Nos primórdios da imunologia, dois pesquisadores defendiam pontos de vistas que pareciam contrários; Elie Metchnikoff acreditava que a resposta inata dos macrófagos abrangia toda a defesa do hospedeiro, enquanto Paul Ehrlich defendia a teoria humoral da imunidade;

Introdução Uma alternativa mais recente é o teste com difusão de gradiente (ETEST);

Introdução Vantagens dos testes de diluição: Fornecem mais dados quantitativos; Podem ser aplicados a uma maior faixa de mogs. isolados do que o teste de difusão; Limitações: Existe potencial para interpretação errônea; O teste de difusão em disco tem registro clínico longo e bem-sucedido;

Introdução A escolha do método a ser utilizado dependerá das necessidades e dos recursos locais; Na avaliação dos testes de sensibilid., a maioria dos investigadores utiliza a seguinte convenção: Erro muito importante: classificação de um microrganismo isolado resistente como suscetível; Erro importante: classificação de um microrganismo isolado suscetível como resistente;

Seleção dos Agentes Antimicrobianos A escolha final dos agentes antimicrobianos para o prontuário deve ser decidida junto com a equipe médica; Em cada comunidade devem ser conhecidos e levados em consideração; Padrões da resistência bacteriana Os padrões de uso do agente antimicrobiano

Importância da padronização A principal melhora na orientação laboratorial dos antibiogramas nas últimas décadas provém do desenvolvimento de procedimentos padrões; É importante aderir aos protocolos para obter resultados passíveis de reprodução; Fatores importantes do Antibiograma: Meio de crescimento: O caldo de cultura e o ágar Mueller-Hinton foram escolhidos para as bactérias aeróbicas e anaeróbicas facultativas;

Fatores importantes do antibiograma pH: Deve estar entre 7,2 e 7,4 a temperatura ambiente. O pH do meio em caldo de cultura pode ser testado diretamente com um eletrodo de pH, e o meio do ágar pode ser testado pela maceração de ágar suficiente, de modo que a ponta do eletrodo possa ser imersa; Soro: O grau de ligação dos antibióticos às proteínas apresenta grande variação. Podem ser obtidos valores diferentes se for adicionado soro ao meio;

Fatores importantes do antibiograma Concentração [ ] de cátions: A concentração de cátions divalentes Ca2+ e Mg2+ afeta os resultados da sensibilidade quando são testadas determinadas combinações de espécies bacterianas e antibióticos; Pseudomonas aeruginosa Reação cruzada

Fatores importantes do antibiograma Concentração [ ] de cátions: O caldo de cultura Mueller-Hinton apresenta [ ]s muito baixas de cátions divalentes e deve ser suplementado para concentrações fisiológicas; Quando os microrganismos estão crescendo em meio deficiente em cátions, a permeabilidade da parede celular aos antibióticos aminoglicosídeos e a outros compostos aumenta; Alguns lotes do ágar Mueller-Hinton podem na verdade apresentar concentração anormalmente alta desses cátions, de modo que são produzidas pequenas zonas inibidoras quando P. aeruginosa é testado com aminoglicosídeos; Assim, os microrganismos são mais sensíveis à ação dos aminoglicosídios, produzindo [ ] inibitória mínima falsamente baixa ou grandes zonas inibidoras;

Fatores importantes do antibiograma Atmosfera: O ágar ou caldo de cultura é incubado em uma incubadora em ar ambiente. Uma incubadora com CO2 não deve ser utilizada para testes de rotina. O ácido carbônico formado na superfície do ágar ou no caldo pode causar redução do pH; Nos laboratórios com pequena carga de trabalho e onde existe apenas incubadora de CO2, é aceitável colocar as placas ou tubos de sensibilidade em uma jarra selada;

Fatores importantes do antibiograma Temperatura: As placas e os tubos devem ser incubados rotineiramente a 35ºC. Quando em temperaturas mais altas, a detecção de estafilococos resistentes a oxacilina fica comprometida. Se houver suspeita de resistência contra oxacilina e não houver manifestações em 35ºC, as placas ou tubos podem ser incubados a 30ºC;

Fatores importantes do antibiograma Inóculo: É, em geral, preparado a partir do caldo de cultura que foi incubado por 4 a 6 horas, quando o crescimento é considerado em fase logarítmica; Devem ser coletadas amostras de várias colônias de aspecto semelhante para diminuir a variação na população bacteriana; A densidade da suspensão é ajustada para aproximadamente 108 CFU/ml;

Escala de McFarland É preparado adicionando-se 0,5 ml de 0,048M BaCl2 (1,175% p/v BaCl2•H2O) a 99,5 ml de 0,36N H2SO4. Alíquotas de 4 a 6 ml do padrão de turbidez do BaSO4 são distribuídas em tubos de mesmo tamanho, fechado com tampa de rosca, firmemente selados e armazenados, no escuro, a temperatura ambiente; Comumente o grau de turbidez no caldo de cultura é comparado com o padrão, visualizando os dois contra um fundo branco no qual foram desenhadas linhas pretas;

Fatores importantes do antibiograma Agentes Antimicrobianos: Discos impregnados com antimicrobianos devem ser armazenados a -20ºC ou menos em condição anidrosa. Os fabricantes de discos precisam controlar rigorosamente a concentração dos agentes antimicrobianos nos discos para 60-120% do teor declarado; a variação existente é em geral consideravelmente menor;

Fatores importantes do antibiograma Agentes Antimicrobianos: Um pequeno estoque pode ser mantido em temperaturas de refrigerador em um dessecador; Os discos sempre devem ser aquecidos até à temperatura ambiente antes de se abrir o dessecador, de modo que a condensação da umidade do ar não reidrate parcialmente os discos.;

Seleção dos agentes antimicrobianos a serem incluídos no relato Apenas os agentes antimicrobianos adequados para a infecção devem ser incluídos no relato; Os fármacos que são ativos apenas no trato urinário não devem ser incluídos no relato se o microrganismo isolado for oriundo de outro local e os agentes que não penetram em um local, como cefazolina ou cefalotina nas meninges, não devem ser incluídos no laudo;

Seleção dos agentes antimicrobianos a serem incluídos no relato O uso de cloranfenicol para infecções do trato urinário é inadequado porque esse agente não é excretado na urina; Os microbiologistas não devem encorajar o uso inadequado incluindo os resultados do antibiograma no laudo;

Seleção dos agentes antimicrobianos a serem incluídos no relato Da mesma forma, Streptococcus pneumoniae isolados do líquido cefalorraquidiano devem ser testados apenas contra um dos seguintes antibióticos: Penicilina, cefotaxima, ceftriaxona, meropenem e vancomicina; Infelizmente, existem pouquíssimas dessas proibições absolutas; A maioria das decisões deve ser tomada junto com os médicos e farmacêuticos;

Teste de sensibilidade em Macrodiluição em Caldo de Cultura Esteve entre os primeiros testes a serem desenvolvidos e ainda serve como método de referência;

Teste de sensibilidade por Diluição em Ágar É o segundo método de referência, foi adaptado com sucesso para uso rotineiro nos grandes laboratórios avaliando apenas as [ ]s escolhidas dos antimicrobianos;

Teste de sensibilidade por Difusão em Disco Assim que o disco impregnado com agente antimicrobiano entra em contato com a superfície úmida do ágar, a água é absorvida pelo filtro de papel e o agente antimicrobiano se difunde para o meio circulante;

Interpretação dos Resultados

Muito Obrigado!!!