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Cultura de tecido subcapsular da GSR Preparação para Microscopia Eletrónica (ME) e Resultados.

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Apresentação em tema: "Cultura de tecido subcapsular da GSR Preparação para Microscopia Eletrónica (ME) e Resultados."— Transcrição da apresentação:

1 Cultura de tecido subcapsular da GSR Preparação para Microscopia Eletrónica (ME) e Resultados

2 Objectivos A não adição de soro aos meios de cultura limita a viabilidade celular Questão: Qual é o efeito da privação de soro acrescentado na ultra-estrutura da zona glomerulosa das GSR em cultura?

3 Material e Métodos Colheita das GSR Descapsulação Fragmentação da cápsula e tecido subcapsular (zona glomerulosa) Cultura em DMEM/F12 com antibiótico e soro bovino fetal durante 24 horas; colheita de alguns fragmentos para ME (ACP) Mudança de meio e divisão dos fragmentos em meio com soro (B1CP) e sem soro (B2CP)

4 Material e Métodos Processamento para ME Fixação em glutaraldeído e tetróxido de ósmio Desidatração em etanol de concentração crescente (30º, 50º, 70º, 90º e absoluto) Diafanização em óxido de propileno Inclusão em EPON

5 Material e Métodos Processamento para ME Realização de cortes ultra-finos (~100 nm) em ultramicrótomo Contrastação com acetato de uranilo e citrato de chumbo Observação num ME Jeol.

6 Resultados B1CP – cultura de 48 horas no mesmo meio: ACP – cultura de 24 horas

7 Resultados B2CP – cultura de 48 horas com privação de soro nas últimas 24 horas

8 Conclusões Condições de cultura requerem a presença de soro para preservação da integridade estrutural das células A experiência não estabelece quais são os factores séricos que permitem esta preservação Não é de excluir a presença de contaminantes às 48 horas em B2CP; outros estudos seriam necessários para a certificar

9 Autores João Nascimento João Silva


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