Cultura de tecido subcapsular da GSR

Apresentação em tema: "Cultura de tecido subcapsular da GSR"— Transcrição da apresentação:

1 Cultura de tecido subcapsular da GSR
Preparação para Microscopia Eletrónica (ME) e Resultados

2 Objectivos A não adição de soro aos meios de cultura limita a viabilidade celular Questão: Qual é o efeito da privação de soro acrescentado na ultra-estrutura da zona glomerulosa das GSR em cultura?

3 Material e Métodos Colheita das GSR Descapsulação
Fragmentação da cápsula e tecido subcapsular (zona glomerulosa) Cultura em DMEM/F12 com antibiótico e soro bovino fetal durante 24 horas; colheita de alguns fragmentos para ME (ACP) Mudança de meio e divisão dos fragmentos em meio com soro (B1CP) e sem soro (B2CP)

4 Material e Métodos Processamento para ME
Fixação em glutaraldeído e tetróxido de ósmio Desidatração em etanol de concentração crescente (30º, 50º, 70º, 90º e absoluto) Diafanização em óxido de propileno Inclusão em EPON

5 Material e Métodos Processamento para ME
Realização de cortes ultra-finos (~100 nm) em ultramicrótomo Contrastação com acetato de uranilo e citrato de chumbo Observação num ME Jeol.

6 Resultados ACP – cultura de 24 horas
B1CP – cultura de 48 horas no mesmo meio: A imagem é de B1CP. ACP e B1CP estiverem sujeitos às mesmas condições de cultura (meio + antibiótico + soro; 37ºC 5% CO2). Apenas diferem na duração da cultura (24h para ACP e 48h para B1CP) Logo, ACP e B1CP apresentam a mesma integridade estrutural das células e organelos Mitocôndrias (integridade das cristas e elevada densidade da matriz; de notar a forma característica das cristas bem diferente da zona fasciculada), Golgi (integridade das membranas), cromatina (periférica), membrana nuclear intacta

7 Resultados B2CP – cultura de 48 horas com privação de soro nas últimas 24 horas B2CP – mesmas condições de ACP e B1CP nas 1as 24h (meio + soro; 37ºC 5% CO2) Privação de soro bovino fetal nas últimas 24 horas. Lesões notórias nas células possivelmente derivado da privação de soro. Sem observação de organelos intactos e cromatina fragmentada. Contudo, possibilidade de contaminação fúngica.

8 Conclusões Condições de cultura requerem a presença de soro para preservação da integridade estrutural das células A experiência não estabelece quais são os factores séricos que permitem esta preservação Não é de excluir a presença de contaminantes às 48 horas em B2CP; outros estudos seriam necessários para a certificar

9 Autores João Nascimento João Silva