ASPECTOS MOLECULARES, CELULARES E TECIDUAIS EM MODELOS DE DOENÇAS METABÓLICAS EM FÊMEAS Eliana Hiromi Akamine Departamento de Fisiologia e Biofísica –

Apresentação em tema: "ASPECTOS MOLECULARES, CELULARES E TECIDUAIS EM MODELOS DE DOENÇAS METABÓLICAS EM FÊMEAS Eliana Hiromi Akamine Departamento de Fisiologia e Biofísica –"— Transcrição da apresentação:

1 ASPECTOS MOLECULARES, CELULARES E TECIDUAIS EM MODELOS DE DOENÇAS METABÓLICAS EM FÊMEAS Eliana Hiromi Akamine Departamento de Fisiologia e Biofísica – ICB – USP setembro/2006

2 ÓXIDO NÍTRICO, ESPÉCIES REATIVAS DO OXIGÊNIO E PROSTANÓIDES NA VASODILATAÇÃO DEPENDENTE DO ENDOTÉLIO DE RATAS DIABÉTICAS

3 RR RT AGONISTA EDRFEDCF Célula Endotelial Célula do Músculo Liso Vascular EDHF PGI 2 NO AA PGH 2 TXA 2 PGF 2  O2-O2- EDHF PGI 2 NO RelaxamentoContração K+K+ K+K+ Ca 2+ AMPc GMPc ATP GTP Adenilato Ciclase Guanilato Ciclase - Diabetes - - - - + + De Vriese. Br J Pharmacol, 130:963-974, 2000

4 DIFERENÇAS SEXUAIS NO DIABETES MELLITUS As alterações vasculares do diabetes mellitus são mais acentuadas em fêmeas: - BARRETT-CONNER et al., 1991; BELL, 1994; PINNA et al., 2001; MAYHAN et al., 2002; MARRA et al., 2002; CHAN et al., 2003; DABELEA et al., 2003; THE DECODE STUDY GROUP, 2003; TOLEDO et al., 2003.

5 OBJETIVOS Avaliar o envolvimento do sistema do óxido nítrico, espécies reativas do oxigênio e da via da ciclooxigenase na disfunção vascular de ratas diabéticas. Verificar o efeito do tratamento crônico com insulina na disfunção vascular nesse modelo.

6 INDUÇÃO DO DIABETES Animais: ratas Wistar, 8-10 semanas Indução do diabetes: aloxana, 40 mg/kg, i.v. Foram utilizadas ratas diabéticas com níveis glicêmicos acima de 200 mg/dl Tratamento com insulina: 2 UI/animal/dia, durante 12 dias, via subcutânea

7 RESULTADOS

8 Características gerais ControleDiabéticaInsulina Ganho de peso (g)67,5±3,912,4±5,3**39,5±6,1 †† Glicemia (mg/dl)87,2±2,3429,7±27,2 § após 4h 114,3±20,0 após 15h 492,4±33,9 § Insulina (ng/ml)1,5±0,30,2±0,07||0,3±0,06|| Glicosúria (mg/dl)negativo900,0±66,7522,2±101,1 ‡ Útero/100g (mg)37,7±1,624,3±2,5***41,2±2,9 Estradiol (pg/ml)26,3±7,924,1±4,823,9±3,2 Progesterona (ng/ml)26,0±3,510,5±1,4*19,1±1,9

9 Microscopia intravital 20.2

10 % aumento diâmetro inicial acetilcolina * 0 2 4 6 8 10 1110 ControleDiabética + insulina histamina 0 2 4 6 8 ** 090709 ControleDiabética + insulina * bradicinina 0 2 4 6 8 10 09 ControleDiabética + insulina Akamine et al. J Vasc Res, 43:309-320, 2006

11 DIABETES NOS INSULINA ? ?

12 Atividade NOS ** 0 20 40 60 80 pmol/min/mg proteína ControleDiabética + insulina Expressão eNOS 0 0,5 1 1,5 eNOS/GADPH 04 ControleDiabética + insulina GADPH eNOS

13 DIABETES Atividade - NOS Expressão - NOS BH 4 ?

14 % aumento diâmetro inicial *** 0 2 4 6 8 bradicinina 09 ControleDiabética após BH 4 histamina *** 0 2 4 6 8 0908 ControleDiabética após BH 4 acetilcolina ** 0 2 4 6 8 10 1109 ControleDiabética após BH 4

15 NOS BH 4 L-arginina + O 2 L-citrulina + NO O2-O2- DIABETES ? INSULINA ? BH 4 ?

16 BasalEstimulada ControleDiabética + insulina BH 4 - BH 4 + ControleDiabética + insulina Controle DiabéticaDiabética + insulina * * ‡ † 0 2 4 6 8 10 12 14 índice de fluorescência ‡ † ‡ † BH 4 ----++++ Basal Acetilcolina BradicininaHistamina

17 NOS BH 4 L-arginina + O 2 L-citrulina + NO O2-O2- DIABETES ? BH 4 ? INSULINA ? ?

18 ControleDiabética + insulina Diabética + BH 4 Diabética + L-NAME 0 10 20 30 40 50 60 70 % núcleos marcados * CDD + insulina 08 15 D + BH 4 06 D + L-NAME 08

19 NOS BH 4 L-arginina + O 2 L-citrulina + NO O2-O2- vasodilatação ?

20 acetilcolina * 0 2 4 6 8 09 ControleDiabética após MnTMPyP % aumento diâmetro inicial bradicinina * 0 2 4 6 8 09 ControleDiabética após MnTMPyP histamina * 0 2 4 6 8 11 ControleDiabética após MnTMPyP

21 SOD H2O2H2O2 NOS BH 4 L-arginina + O 2 L-citrulina + NO O2-O2- ?

22 Atividade Cu/Zn SOD 0 0,2 0,4 0,6 U/ml * 070807 ControleDiabética + insulina Expressão Cu/Zn SOD 0 0,4 0,8 1,2 1,6 Cu/Zn SOD/GADPH 04 ControleDiabética + insulina GADPH Cu/Zn SOD

23 DIABETES COX ? Vasodilatação ?

24 acetilcolina * 0 2 4 6 8 12 C + diclofenaco DD + diclofenaco 12 C % aumento diâmetro inicial bradicinina * 0 2 4 6 8 10 1112 D 10 CC + diclofenaco D + diclofenaco histamina ** 0 2 4 6 8 09 D CC + diclofenaco D + diclofenaco Akamine et al. J Vasc Res, 43:401- 410, 2006

25 DIABETES Prostanóides ? Vasodilatação ?

26 mmHg 0 50 100 1:43:201:45:001:46:401:48:201:50:001:51:401:53:20 Noradrenalina – 10 -5 M 60  l de acetilcolina 10 -5 M Registro típico da reatividade do leito arteriolar perfundido

27 Reatividade - acetilcolina

28 PGF 2  0 70 140 210 280 350 PGF 2  (pg/ml) ††† * 0507 CD 05 CD Basal Acetilcolina

29 TXA 2 0 30 60 90 120 TXA 2 (pg/ml) 06 CD 0506 CD Basal Acetilcolina * *

30 Prostaciclina 0 400 800 1200 1600 2000 Prostaciclina (pg/ml) †*†* 0506 CD CD Basal Acetilcolina

31 PGF 2  / TXA 2 / prostaciclina COX O2-O2- DIABETES ?

32 ControleDiabéticaDiabética + diclofenaco 0 10 20 30 40 50 60 70 % núcleos marcados * CD 08 12 D + diclofenaco

33 PGF 2  / TXA 2 / prostaciclina NO ONOO - COX O2-O2- + DIABETES ?

34 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 Densidade óptica * Controle Diabética 04 50kDa 30kDa 20kDa ControleDiabética Expressão de proteínas contendo nitrotirosina

35 PGF 2  / TXA 2 / prostaciclina Diabetes NOS BH 4 L-arginina + O 2 L-citrulina + NO O2-O2- H2O2H2O2 ONOO - + BH 4 BH 2 COX O2-O2- + SOD H2O2H2O2 Vasodilatação

36 AGRADECIMENTOS Zuleica B. Fortes Dorothy Nigro Maria Helena C. Carvalho Rita de Cássia A. Tostes Maria Aparecida de Oliveira Anna Elisa Tiyeko Urakawa Sônia Maria R. Leite Cristóforo Scavone Elisa M. Kawamoto Luiz Roberto G. Britto Carla Roberta O. Carvalho Luciene Maria Ribeiro Anderson Carlos Marçal Silvana Bordin Luciana Chagas Caperuto Luciana Rossoni Camila Venceslau Ana Paula Davel Renata Koba