Ac. Fernando Beani Margeotto

Apresentação em tema: "Ac. Fernando Beani Margeotto"— Transcrição da apresentação:

1 Ac. Fernando Beani Margeotto
A hiperexpressão do gene ITGAV está associada com progressão e disseminação do câncer colorretal Bom dia a todos. Eu sou Fernando Beani Margeotto, acadêmico do quinto ano de medicina da faculdade de medicina do ABC e hoje apresentarei o meu trabalho de iniciação científica que teve como orientador o Prof. Dr. Jaques Waisberg. O título do trabalho é: A hiperexpressão do gene ITGAV está associada com progressão e disseminação do câncer colorretal. Orientador: Prof. Dr. Jaques Waisberg Ac. Fernando Beani Margeotto

2 X INTRODUÇÃO Invasão Fatores de crescimento + receptores Regulação
Mestástases X [Quail DF and Joyce JA. Nat Med 19: , 2013] Desenvolvimento de terapia anticâncer Diversos conjuntos de fatores de crescimento juntamente com seus respectivos receptores foram considerados terem envolvimento importante na regulação da invasão e metástases tumorais. Atualmente, a estratégia para o desenvolvimento de terapia anticâncer busca a interrupção no eixo fator de crescimento – receptor. [Utsugi T. Jpn J Clin Oncol 43: , 2013]

3 Remodelação e Degredação
INTRODUÇÃO Colágeno Glicoproteínas não colágeno Matriz extracelular (MEC) Elastina Proteoglicanos Remodelação e Degredação Proteólise pericelular Quando falamos em expressão genica e sintese de proteínas de celulas tumorais, é importante salientar o papel da Matriz extracelular (MEC), que é formada por colágeno, glicoproteínas não colágeno, proteina elastina e proteoglicanos que são sintetizados e armazenados por fibroblastos circulantes do tecido cojuntivo. A remodelação e degradação da MEC é feita pela proteólise pericelular e esta influencia a transformação de celulas malignas, crescimento tumoral, capacidade de metástase, alteração na angiogênese e apotose de celulas tumorais e impactar fatores de crescimento epiteliais. Transformação de células malignas Crescimento tumoral Capacidade de Metástase Alteração na angiogênse e apoptose Fatores de crescimento epiteliais [Winder T and Lenz HJ. Cancer Treat Rev 36: , 2010]

4 INTRODUÇÃO SPARC THBS1 MEC ITGAV VCAM-1
Das proteínas que estão presentes na MEC, para o presente estudo, enfocaremos em 4 principais: SPARC, THBS1, ITGAV e VCAM-1. Sendo elas sintetizadas a partir dos genes que recebem os mesmos nomes ITGAV VCAM-1

5 INTRODUÇÃO 26.5 kb SPARC 5q31-q33
[Nagaraju GP and El-Rayes BF. Cancer Lett 328: 10-17, 2013.] 5q31-q33 Modulação das interações célula-célula e célula-matriz Proteína Propriedades adesivas e inibidoras de crescimento sobre as células não transformadas O Gene SPARC tem um comprimento de 26.5 kilobases, esta localizado no cromossomo 5q31-133, sendo responsável pela modulação das interações célula-célula e célula-matriz. A proteína sintetizada por ele, que recebe o mesmo nome, tem propriedades adesivas e inibidoras de crescimento sobre as células não transformadas. [Liu YP and Hsiao M. Gut 62: , 2013]

6 INTRODUÇÃO 2q31-q32 SPARC ITGAV Angiogênese Migração Expressão tumoral
Sobrevivência Início de metástases Invasão A integrina alfa V é um gene localizado no cromossomo 2q31-q32 e sua expressão tumoral influencia na angiogênese, migração, sobrevivência das celulas tumorais, inicio de metástase e invasão destas células. A proteína sintetizada pelo gene ITGAV que recebe o mesmo nome é responsável pela ligação das células à matriz. Proteína [ Astarci E, et al. FEBS J 279: , ] Ligação das células à matriz [Kamata T, et al. PLoS One 8: e66096, 2013.]

7 INTRODUÇÃO Angiogênese 15q14 Apoptose THBS1 SPARC Funções:
Ativação e transformação do fator de crescimento beta (TGF-beta) Regulação do sistema imune [Greco SA, et al. BMC Cancer 10: 494, 2010.] angiogênese Expressão Crescimento tumoral lento O Gene THBS1 localiza-se no cromossomo 15q14 e tem como funções a angiogênese, apoptose, ativação e transformação do fator de crescimento beta (tgf-beta) e regulação do sistema imune. Quando há um expressão aumentada desse gene ocorre um crescimento tumoral lento, exibindo menos angiogênese e ocorrem menos metástase, ao passo que um expressão dimunuida desse gene é inversamente proporcional a recorrência neoplásica e redução na sobrevivência em CCR. Essas características fazem do gene THBS1 um alvo atrativo para o tratamento do câncer. metástates Recorrência neoplásica Expressão Inversamente proporcional Sobrevivência em CCR [Ma Y, et al. Circ Res 113: , 2013.]

8 Microvasculatura das células endoteliais
INTRODUÇÃO 1p31-p32 VCAM-1 Microvasculatura das células endoteliais SPARC Proteína VLA-4 Complexo A4b1 O Gene VCAM-1 está localizado no cromossomo 1p31-p32. Ele sintetiza a proteina de mesmo nome que se liga especificamente a VLA-4 na microvasculatura das celulas endoteliais, formando o complexo A4b1 que facilita a aderência das células tumorais no endotelio microvascular e o inicio de metastases. Facilita a aderência das células tumorais Ínicio de metástases

9 OBJETIVOS Avaliar as relações entre as expressões dos genes SPARC, ITGAV, THBS1 e VCAM-1 e suas proteínas em tumores de pacientes com CCR, correlacionando essas expressões com os parâmetros clínicos e histológicos de progressão neoplásica e disseminação. SPARC Analisar a possível associação entre a expressão destas proteínas da MEC e marcadores biológicos relacionados com proliferação epitelial (fator de crescimento epidermal – EGFR, e Ki67), angiogênese (fator de crescimento vascular endotelial – VEGF) e apoptose (p53 e Bcl-2). Ler tudo

10 MÉTODO Agosto de 2006 Julho de 2009 114 pacientes com CCR
Ressecção primária Agosto de 2006 Julho de 2009 Real time PCR (RT- PCR) SPARC Genes de interesse Imuno-histoquímica (Tissue microarray – TMA) Ambos sexos Incluídos: Idade ≥ 18 anos QT ou RT neoadjuvante Sem ressecção de sítio primário de CCR Excluídos: Diagnóstico prévio ou atual (não câncer de pele não melanoma ou carcinoma cervical in situ) História familiar de CCR

11 MÉTODO

12 MÉTODO Tabela I – Características clínico-patológicas dos 114 pacientes com carcinoma colorretal Variáveis n % SPARC

13 MÉTODO Tabela I – Características clínico-patológicas dos 114 pacientes com carcinoma colorretal Variáveis n % SPARC *28 pacientes com <12 linfonodos dissecados ou analisados

14 MÉTODO Tabela I – Características clínico-patológicas dos 114 pacientes com carcinoma colorretal Variáveis n % SPARC

15 MÉTODO U-teste não paramétrico Mann-Whitney Variáveis quant.
Teste qui-quadrado (x2) Váriáveis qual. ou freq. e prop. SPARC Análise estatística: Teste exato de Fisher Hipóteses não atingidas Associação entre genes e marcadores Coef. de correlação de Spearman Teste de Shapiro-Wilk Verificar dist. normal dos dados SPSS software™ Análise dos dados * Significância estatística = p < 0.05

16 RESULTADOS SPARC A tabela II faz uma comparação entre a expressão dos genes da MEC pelo RT-PCR, covariáveis clinico-patologica e validação atraves da proteína correspondente avaliada por IHQ no CCR. Podemos observar que todos os genes tiveram um fold regulation significativo com relação as suas covariaveis, porem o unico que teve validação IHQ referente a proteina associada foi o ITGAV com p=0.001

17 RESULTADOS SPARC A tabela IV mostra a regressão logística para a imunoexpressão das proteinas da matriz extracelular nos paciente com CCR, mostrando que as variaveis idenpendentes foram a hiperexpressão do gene ITGAV para a presença de metástase linfonodal, hiperexpressão do THBS1 na presença de um nivel de infiltração mais profundo (T3+T4) na parede intestinal e a hiperexpressão do VCAM-1 para presença de invasão perineural.

18 RESULTADOS SPARC A tabela V mostra a associação entre a expressão IHQ das proteinas da matriz extracelular e expressão IHQ de marcadores de proliferação celular (EGFR e Ki67), de angiogênese (VEGF) e apoptose (p53 e Bcl-2) em pacientes com CCR, mostrando que a proteína SPARC teve uma correlação fraca e inversa com a expressão do VEGF. Ao passo que a proteina ITGAV mostrou uma correlação forte e direta com o EGFR, uma correlação direta e moderada com o marcador Ki67 e uma correlação fraca e direta com o marcador p53. A proteina VCAM-1 mostrou uma correlação fraca e inversa em relação aos marcadores Ki67 e p53. Ja a proteina THBS1 não teve nenhuma correlação significante.

19 RESULTADOS SPARC A figura é apenas para demonstrar o método de comparação entre a hiperexpressão e baixa expressão das proteinas da MEC.

20 CONCLUSÕES A hiperexpressão genética e proteica do ITGAV estão associadas com uma possibilidade maior de progressão e disseminação do CCR por via da invasão perineural. SPARC A forte correlação entre a expressão IHQ observada entre as proteínas EGFR e ITGAV sugere intereções entre essas duas vias de sinalização. A expressão do gene SPARC parece estar associada com o efeito anti-angiogênico por meio de downregulation do VEGF

21 OBRIGADO! SPARC Ac. Fernando Beani Margeotto
Orientador: Prof. Dr. Jaques Waisberg