SEQUENCIAMENTO DE DNA
SEQUENCIAMENTO DE DNA TÉCNICA PRÁTICA MÉDICA HOJE FUTURO
TÉCNICA: 1. EXTRAÇÃO DO DNA: A TÉCNICA VARIA DE ACORDO COM O MATERIAL. PROTEINASE DETERGENTES CENTRÍFUGA ETANOL
PCR {DNA + PRIMER + dNTP + Taq polimerase 95o C : denatura TÉCNICA 2. AMPLIFICAÇÃO PCR {DNA + PRIMER + dNTP + Taq polimerase 95o C : denatura 60o C: anelamento do primer e extensão da molécula pela taq polimerase
3. ANÁLISE E QUANTIFICAÇÃO DO MATERIAL AMPLIFICADO
TÉCNICA 4. MARCAÇÃO PCR { MATERIAL AMPLIFICADO + PRIMER+ dNTPs + ddNTPs MARCADOS + Taq polimerase A Taq pol pode adicionar também análogos dos nucleotídeos. O método de Sanger usa essa habilidade para incorporar ddNTPs à sequência. Quando um ddNTPs é incorporado à cadeia, a extensão termina seletivamente em A,C,G ou T devido a falta o grupo 3´OH.
TÉCNICA 5. SEQUENCIAMENTO: o sequenciador automático detecta a fluorescência dos 4 diferentes ddNTPs marcados. As quatro cores podem ser detectadas isoladamente , graças a eletroforese capilar.
PREVENÇÃO GENOTÍPICA
PREVENÇÃO FENOTÍPICA