Interações Antígeno-Anticorpo Ana Cláudia Carvalho Gouveia

Interações Ag - Ac Ligações não covalentes Reversíveis

Características das interações Ag-Ac Afinidade Força de interação entre um único sítio de ligação Ag-Ac (em um único epítopo).

Características das interações Ag-Ac Avidez - Força de interações total entre Ac e Ag. - Soma das afinidades de todos epítopos envolvidos Especificidade - Capacidade do Ac distinguir seu imunógeno de outros Ags.

Características das interações Ag-Ac Reação cruzada - Dois Ag diferentes apresentam epítopos estruturalmente semelhantes - Ac específicos para um epítopo se ligam a um epítopo não relacionado, mas com propriedades químicas similares.

Métodos Reagentes não marcados Reação de aglutinação (A ligação do Ac altera o estado físico do Ag) Reação de aglutinação Reação de precipitação Reagentes marcados RIA ELISA IF, citometria de fluxo Western Blotting

Reação de aglutinação (Ag insolúvel) Direta eritrócitos (hemaglutinação), bactérias, fungos Passiva látex Qualitativos Semi-quantitativos Ex.: classificação sanguinea Ex.: detectar infecções

Tipagem sanguínea

Inibição da Aglutinação

Reação de precipitação Quantidades de Ag solúvel são adicionadas a uma quantidade fixa de soro contendo o Ac. A medida que a quantidade de Ag aumenta, a quantidade de precipitado também aumenta até um máximo, para depois diminuir. Precipitado visível

Precipitação em solução

Precipitação em gel Imunodifusão Radial

Precipitação em gel Imunodifusão Dupla

Reagentes marcados Enzimas, fluorocromos, isótopos Tipos: RIA ELISA IF, citometria de fluxo Western Blotting

Radioimunoensaios Utilizam Ac conjugados com radioisótopos para quantificar os ensaios. • Vantagens: – Alta sensibilidade – Permite medidas rápidas e precisas • Desvantagens: – Custo – Vida média dos reagentes – Risco operacional (radiação)

ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) - Baseia-se na quantificação de uma reação enzimática associada com complexos imunes.

Imunofluorescência - Utilizam-se Ac ou Ag conjugados a moléculas reveladoras chamadas fluorocromos. Visualização em microscópio de fluorescência

Isotiocianato de fluoresceína (FITC) VERDE Ficoeritrina (FE) VERMELHA

Imunofluorescência Direta Aplicações: Detecção direta de microrganismos (secreções, urina, cortes de tecidos); Identificação de subpopulações de linfócitos; Fenotipagem de células tumorais Ex.: Detecção de Chlamydia trachomatis em secreção uretral

Imunofluorescência Indireta Aplicações: Detecção de anticorpos específicos contra diversos microrganismos; Diagnóstico de doenças auto-imunes; Ex.: Detecção de Ac anti- T. cruzi Detecção de Ac anti-nuclear

Citometria de fluxo Detecta, separa e quantifica células contendo um antígeno particular, marcadas com um fluorocromo; Cada anticorpo é marcado com um fluorocromo diferente; As células são então analizadas no citômetro de fluxo.

Citometria de fluxo As células saem de uma célula de fluxo e são iluminadas por um raio laser; A quantidade de raios laser que é dispersa para fora das células durante a passagem das mesmas pelo laser pode ser medida, o que proporciona informação a respeito do tamanho das células.

- O laser pode também excitar o fluorocromo nas células e a luz fluorescente emitida pode ser medida por um ou mais detectores.

Caracterização de populações celulares; Contagem de microrganismos; CD4 CD8 CD19 Aplicações: Caracterização de populações celulares; Contagem de microrganismos; Separação de populações celulares de acordo com a densidade dos antígenos, tamanho e granulosidade das células; - Análise de proliferação celular.

Western Blot

Ensaios imunocromatográficos Teste rápido de HIV (Ac anti-HIV) Diagnóstico de gravidez ( detecção de beta HCG)

Técnicas de Biologia Molecular

Reação da Polimerase em Cadeia Amostra + Reagentes

RT-PCR (Reverse Transcriptase – Polymerase Chain Reaction)

Termociclador

Detecção da Amplificação Eletroforese em gel de poliacrilamida Produto (PCR ou RT-PCR)

Relatório Qual a principal diferença entre os métodos de ELISA e imunofluorescência? 2. Em uma tipagem sanguínea houve aglutinação ao se misturar o sangue pesquisado e os soros anti-AB e anti-Rh. Determine o tipo sanguíneo e faça um esquema explicando a reação ocorrida. Quais as características do anticorpo que podem influenciar a sua ligação ao antígeno? Ao realizar os exames pré-natais, a gestante J.A.C, 26 anos, apresentou teste ELISA positivo para HIV. Como você interpreta este resultado? Descreva suscintamente a reação ocorrida. Qual imunoensaio você escolheria para o acompanhar o prognóstico de um paciente com linfoma? Justifique sua resposta.