Proteínas totais e séricas PROF; DIMAS CAMPIOLO

Proteínas totais e séricas Albumina Globulinas

Proteínas totais Existem mais de 300 proteínas diferentes já identificadas no plasma sanguíneo. Apenas algumas são avaliadas rotineiramente Amostras mais usadas: sangue, urina, LCR, líquido amniótico, peritonial, pleural ou sinovial, saliva ou fezes.

Proteínas totais Funções: - transporte - manutenção da pressão coloidosmótica - tamponamento de ΔpH - imunidade humoral - atividade enzimática - coagulação - resposta da fase aguda

Proteínas totais A concentração das proteínas plasmáticas é determinada por três fatores: - Velocidade de síntese: A maioria produzida no fígado. Cerca de 25g/dia num indivíduo de 70kgs - Volume de líquido: Cerca de 250g de proteínas são encontradas no compartimento vascular de um homem de 70kgs, dando uma concentração ao redor de 7,0g/dl - Velocidade do catabolismo: As proteínas totais são degradadas, liberando aminoácidos para a síntese de proteínas celulares.

Proteínas totais Determinação das proteínas totais: - Método do Biureto: O cobre, em meio alcalino, reage com a ligação peptídica. O produto apresenta bandas de absorção. Interferentes: Substâncias que possam reagir com o íon cúprico. Ex: Bilirrubina aumentada, triglicerídeos acima de 500mg/dl VR soro: 6,0 – 8,0g/dl

Proteínas totais Outros métodos: - Método de Lowry - Método de Bradford - Método de Smith Paciente: Jejum de 8 horas Amostra: soro sem hemólise e não lipêmico

Proteínas totais Hiperproteinemia - Desidratação (vômito, diarréia ou acidose diabética) - Mieloma múltiplo - Cirrose hepática - Hepatite ativa crônica - Lupus eritematoso sistêmico - Infecções bacteriana crônica Hipoproteinemia - Hemodiluição - Perda renal de proteínas - Queimaduras severas -Desnutrição (Kwashiorkor) -Hipertireoidismo -Hemorragia grave

Albumina Representa cerca de 60% das proteínas do plasma humano. Meia vida de 15-19 dias Velocidade de síntese depende da ingestão protéica e regulada por feedback negativo pelo teor de albumina circulante Produção de cerca de 15g/ dia

Albumina Funções - Regulação osmótica - Transporte e armazenamento : Ácidos graxos e esteróides; bilirrubina; farmacos etc. Síntese : no fígado, na forma de pro-albumina. Degradação: mecanismo desconhecido, degradadas aleatoriamente (novas e velhas), provavelmente pelos endotélio dos capilares, medula óssea e sinusóides hepáticos.

Albumina Determinação da albumina - Métodos de corantes: Metil orange, HABA, verde de bromo cresol(VBC) e púrpura de bromocresol VR: 3,5 a 5,5g/dl - Eletroforese - Fracionamento salino

Albumina Paciente : Não consumir dieta rica em gordura por 48hr antes da prova Amostra: soro, observar postura dos pacientes, pois em pacientes ambulatoriais o teor de albumina é cerca de 0,3g/dL maior que em pacientes hospitalizados. Interferências: Elevação ACO, agentes citotóxicos. Redução  Paracetamol, aspirina, ACO, ampicilina

Albumina Hiperalbuminemia - É rara - Encontrada em casos de carcinomatose metastática, desidratação aguda, diarréia, estresse, febre reumática, meningite, osteomielites, traumatismo, tuberculose, hemoconcentração, entre outros.

Albumina Hipoalbuminemia - Redução da síntese: Cirrose - Ingestão inadequada de proteínas: A síntese é reduzida a um terço durante um jejum de 24hr - Perda protéica extravascular: Síndrome nefrótica (proteinúria massiva) e enteropatia perdedora de proteínas - Queimaduras extensas : a pele é o maior local de armazenamento extravascular da albumina. - Hemodiluição: Ascites, ICC - Estresse - Analbuminemia

Albumina Conseqüências da hipoalbuminemia - Edema facial, macroglossia, icterícia conjuntival - Bradicardia, hipotensão, cardiomegalia - Hepato-esplenomegalia, ascites - Encefalopatias - Atrofia testicular - Ginecomastia, hipotermia

Fracionamento eletroforético A eletroforese de proteínas (EFP) no soro é uma técnica simples para separar as proteínas do soro. É o teste de triagem mais utilizado para investigação de anormalidades das proteínas séricas. Em condições normais, são separadas cinco bandas do soro: albumina, alfa-1, alfa-2, beta e gamaglobulinas. Eventualmente, pode ser observada a presença da pré-albumina.

Fracionamento eletroforético

Eletroforese de proteínas

Fracionamento eletroforético

Globulinas Região α1 -Alfa1-antitripsina (AAT) Tem como função a inibição de várias proteases provenientes dos neutrófilos. Proteção contra destruição da parede alveolar VR: 20 - 60μmol/L

Globulinas - Alfa1-glicoproteína ácida(AAG) Tem como função primária inativar a progesterona, alem de interagir com alguma drogas. Aumentada na artrite reumatóide, Lúpus, queimaduras e infarto. O papel exato da AAG não é conhecido -Alfa1-Fetoproteína (AFP) Usada para detectar defeitos de tubo neural em fetos, examinado através do líquido amniótico VR líquido amniótico: 5 a 25mg/dl -Alfa 1- Lipoproteína Transportadora de lipídeos

Globulinas Região α2 -Haptoglobina (HAP) Transportadora de Hb para o retículo endotelial para ser degradada. Aumentada durante os processos inflamatórios e diminuída em síndromes hemolíticas. - Alfa2-macroglobulinainibidora de proteases. Aumentada durante a infância e na síndrome nefrótica e está diminuída em hepatopatias crônicas. - Ceruplasmina (CER)é fixadora de cobre. Está diminuída nas anemias e aumentada em neoplasias malignas; proteína de fase aguda tardia.

Globulinas Região β1 -Transferritina(TRF)Transporta o ferro do intestino até a medula óssea. Está aumentada na depleção de ferro e diminuída nas perdas protéicas e hepatopatias crônicas. -Hemopexina (HX) Transporta o grupamento Heme até o fígado -Beta-lipoproteína Transportadora de lipídeos -Complemento C4 Resposta humoral, participa da via clássica do complemento. A deficiência resulta redução da resposta a infecções.

Globulinas Região β2 - Fibrinogênio Substrato da trombina, não encontrado em fracionamentos eletroforéticos pois a amostra usada é o soro -Complemento fração C3 Atua na resposta imunológica humoral - Beta2- microglobulina (BMG) Proteína usada para testar a função tubular renal. Elevada em IR

Globulinas Região γ (gama) -Proteína C reativa Marcador não-específico de lesão tecidual, infecção ou necrose celular associada com infarto ou malignidade VR: 0-800μg/dl ImunoglobulinasSintetizadas pelo sistema imune em resposta a uma partícula estranha. -Reconhecem,reagem,neutralizam bactérias, vírus e proteínas estranhas. -Constituídas por proteínas com estrutura em y. -4 cadeias: 2 leves(L) e 2 pesadas(H) - Antígeno se liga a região variável das cadeias. - IgG, IgM, IgA, IgD e IgE

Globulinas Imunoglobulinas (valores de referência) IgG (1,2,3,4)85% das Ig totais, atravessa a barreira placentária VR:800-1800mg/dl IgM 5-10% das Ig totais VR: 50-150mg/dl IgE importante papel na atopia e imunidade antiparasitária VR:0-0,2mg/dl

Globulinas Hipogamaglobulinemia -Imunodeficiências hereditárias -Imunodeficiência adquirida: neoplasias linfóides, IR, terapia imunossupressiva -Mieloma múltiplo, leucemia linfocítica crônica -Crianças prematuras -Fármacos: Fenitoína, carbamazepina, ác. Valpróico

Globulinas Gamopatias policlonais -Aumentos difusos das gamaglobulinemias -Causado por: lepra, tuberculose, cirrose biliar primária, cirrose portal, hepatite crônica ativa, doença de Crohn, lúpus eritematoso sistêmico Gamopatias monoclonais -Encontrada em: Mieloma múltiplo, macroglobulinemia de Waldenström, doença da cadeia pesada (doença de Franklin)

Globulinas Eletroforese de proteínas séricas em gel de agarose, (1) hipergamaglo-bulinemia em processo inflamatório; (2) e (3): fracionamento normal; (4) gama monoclonal no mieloma múltiplo.

Globulinas Perfis eletroforéticos patológicos: -Mau fornecimento protéico: albumina , 1 e 2, ,  -Perdas protéicas – Síndrome Nefrótica: albumina , 1, 2, ,  (varia) -Hepatite crônica: albumina,  -Hepatite aguda: albumina ou normal, 1, 2 normal ou ,  e  -Cirrose: albumina , 1,2 normal ou , , fusão das frações  e 

Globulinas

FIM