Testes de sensibilidade aos antimicrobianos
Mecanismo de ação dos antimicrobianos Inibição da síntese de parede celular Inibição da síntese de proteínas Inibição da transcrição e replicação Lesão de membrana plasmática Inibição de metabólitos (folato)
Antibióticos Mecanismos de resistência Mutações no DNA bacteriano Aquisição de plasmídios contendo genes de resistência Exemplos: Produção de -Lactamases Alterações ribossômicas Alterações de permeabilidade da membrana celular da bactéria Bomba de efluxo
Antibiograma Finalidade Avaliar in vitro a interação fármaco x bactéria Determinando a sensibilidade Concentração inibitória mínima Orientar o Tratamento
Microbiologia Clínica Teste de sensibilidade - Métodos Kirby-Bauer: Difusão com disco (disco-difusão) Diluição em caldo (macro ou micro) E-test Automação
Disco – difusão ou antibiograma Princípio Qualitativo Baixo custo, Rapidez, Padronização e interpretação fácil Flexibilidade na escolha dos Antimicrobianos Mínimo 12 antimicrobianos por placa
Disco – difusão ou antibiograma Interpretação e relato dos resultados Sensível: Dosagem habitual do antimicrobiano testado inibe o crescimento bacteriano Intermediário: Concentrações maiores do que as usuais podem inibir o microrganismo Resistente: Não é inibido
Resistências de importância clínica Klebsiella pneumoniae resistentes à cefoxitina e ceftazidima – enzima TEM-10 (-lactamase ) Enterococcus faecalis e Enterococcus faecium resistentes à vancomicina Staphylococcus – resistente a - lactâmicos e Vancomicina Streptococcus -hemolíticos – resistente à penicilina Streptococcus viridans - Vancomicina Neisseria gonorrhoeae - resistente à ceftriaxona Neisseria meningitidis - resistente à penicilina Enterobactérias - resistentes ao imipenem
Disco-difusão - Ágar Mueller Hinton Princípio do Métodos Disco-difusão - Ágar Mueller Hinton Discos de papel filtro Fatores de Influências: velocidade de difusão, ph 7,2 a 7,4, estocagem das placas, temperatura e quantidade de ágar, inóculo bacteriano Padrão de Turvação de Sulfato de Bário - Escala (0,5) de Macfarland 15 minutos após a colocação dos discos são invertidas e incubadas Leitura dos halos 24 horas após incubação (Utilizar cepas padrão )
Princípio do Métodos Disco-difusão
Sensível ou resistente?
Leitura e interpretação mm
Resistência induzível
Macrodiluição em caldo CIM - dose mínima de antibiótico que, adicionada ao meio de cultura (líquido ou sólido), é capaz de inibir totalmente o crescimento de um inóculo padrão
Etest®Difusão
E-test - MIC
Interpretação do E-test
Figura representativa de um E-TEST
Poder bactericida do soro Teste realizado para verificar o efeito antimicrobiano do soro de pacientes em uso de antimicrobiano a pelo menos 72 horas e com infecção grave
Detecção de beta-lactamase (ESBL)
KPC – Klebsiella pneumoniae carbapenemase
Vitek System Cartão com 10 a 12 drogas Isolamento e adequação do inóculo Painéis de ATB com combinações pré estabelecidos Cartão com 10 a 12 drogas