Preparação de Amostras para Análise Aula 3 2010

Preparação- 3 etapas Homogeneização do conteúdo e retirada da amostra analítica A preparação da primeira diluição da unidade analítica A preparação de diluições decimais seriadas para inoculação nos meios de cultura.

Antes de Iniciar os procedimentos devemos- ISO 7218 (1996) Área de trabalho limpa e portas e janelas fechadas Desinfecção das superfícies: etanol 70%, etc.) Todo o material necessário nas bancadas. Lavar as mãos com desinfetante adequado. Trabalhar em capela o perto da chama do bico de bunsen. Flambar a alça antes da inoculação Depois de usar os utensílios acomodar em bandejas de descarte

Continuação- Todos os instrumentos devem ser previamente esterilizados, flambados. Antes de abrir embalagens, desinfetar área externa com etanol 70% .(embalagens flexíveis cortar com tesoura estéril. Latas easy-open abrir assepticamente, use abridor de latas estéril para outro tipo de latas. Anotar qualquer anormalidade na embalagem, lata, amostra em geral.

Homogeneização da amostra e Retirada da Unidade analítica Unidade analítica é a quantidade de material retirado da amostra para ser utilizado em um ou mais ensaios. Unidades analíticas para os ensaios de presença/ausência com enriquecimento em caldo específico É requerida uma unidade analítica para cada ensaio. Ex. Salmonella, Listeria monocitogenes, Yersinia enterocolitica, Enterobacter Sakazakii, vibrio cholerarae. b) Unidade analíticas para o ensaios com tratamento diferenciado da amostra Esterilidade comercial, contagem de esporos de bactérias, contagem de bolores termorresistentes e outros. c) Unidade analítica para os ensaios gerais de quantificação Contagem total de aeróbios mesofilos ou psicrotróficos, contagem de bolores e leveduras, contagem de bactérias lácticas, contagem de

enterococos, contagem de enterobactérias, contagem de coliformes totais/fecais/E.coli, S aureus, B cereus e C. Perfringes. No Brasil geralmente é 25 g ou mL de amostra. A ISO 6887-1 (1999) recomenda no mínimo 10 g para sólidos e 10 mL para líquidos. Retirada de Amostras liquidas- (viscosidade não maior que a do leite) Deve haver espaço suficiente para agitar. (Inverter a embalagem 25 vezes). Uso de pipetas estéreis. O preenchimento do volume for 2/3 parte do frasco (inverter 25 vezes em um arco de 30 cm, em 7 segundos. Se não houver espaço para agitar (utilizar outro frasco estéril e transferir de um frasco para outro três vezes. Líquidos gaseificados, transferir para frasco estéril de boca larga, se houver filtração por membrana dispensar o uso de frascos de boca larga.

Procedimentos para a homogeneização e retirada da unidade analítica de produtos sólidos ou líquidos concentrados Anexo 2.1- do Livro p.38-39 Exemplos: Caranguejos e lagostas- Recomenda quebrar a casca com martelo estéril e remover o maximo a carne na retirada da unidade analítica. Iogurtes com pedaços de frutas- Recomenda liquidificar por 1 minutos antes da retirada de unidade analítica. Produtos muito duros- A ISO 6887-4 (2003) Recomenda colocar em uma bolsa plástica estéril e fragmentar em pequenas partes com um martelo estéril. Misturar bem a unidade fragmentada. Outros: produtos em pó, peças de alimentos sólidos, ovos em casca, cortes de carne, moluscos ouriços, etc.

Procedimento para a retirada analítica pela técnica do esfregaço de superfície Alimentos cuja contaminação é superficial: carcaças de peixes, suínos, aves Aplica- se a: mesas utensílios, aventais, embalagens Utiliza-se: swabs estéreis (áreas pequenas), esponjas estéreis (áreas grandes). Os swabs podem ser preparados no laboratório. (usar algodão estéril). Amostragens com swabs:

Procedimento de retirada de amostra pela técnica de lavagem superficial Para alimentos de contaminação predominantemente superficial: grãos, sementes, cascas de ovos, castanhas, carcaças; Lavagem de carcaças: sempre pesar, tampão fosfato pH 7,2; cada ml lavado corresponde ao peso da amostra dividido por 400. Outros alimentos: 1:1 (diluição), cada ml corresponde a 1 g de amostra. Embalagens com tampa a prova de vazamento-1/5 do volume. Volume da embalagem 500 ml e o volume do diluente 100 ml, cada ml do lavado corresponde a 5 cm3.