Metodologia no Imunodiagnóstico Coleta, conservação e remessa do material. Interpretação dos resultados.

Acurácia Concordância entre o resultado obtido e o “resultado real” Método de referência

Precisão Concordância entre várias repetições do teste. Reprodutibilidade/ Repetibilidade

Acurácia

Sem acurácia

Com precisão mas sem acurácia

Precisão e Acurácia

Pode um animal saudável ter um resultado anormal? Intervalo de referência

SENSIBILIDADE A sensibilidade de um teste é definida pela proporção de animais com a doença de interesse que têm o resultado do teste positivo. Indica quão bom é o teste para identificar os indivíduos doentes. Porcentagem de resultados positivos em pacientes com a doença Uma sensbilidade de 95% significa que 95% dos pacientes com a doença serão identificados e que 5% dos pacientes terão um resultado “falso negativo”.

ESPECIFICIDADE A especificidade de um teste é a proporção de animais sem a doença que tem o teste negativo. Indica quão bom é o teste para identificar os indivíduos  não doentes Porcentagem de resultados negativos em pacientes sem a doença. Uma especificidade de 95% significa que…. falso positivo.

Sensibilidade e Especificidade Doença Presente Ausente Total Teste Pos A Verdadeiro positivo B Falso positivo a+b Neg C Falso negativo D Verdadeiro negativo c+d a+c b+d Sensibilidade = A/ (A+C) Especificidade = D/ (B+D)

Necessário para o diagnóstico de doença potencialmente grave Sensível Específico Necessário para o diagnóstico de doença potencialmente grave Particularmente necessário quando um resultado falso positivo pode ser muito lesivo Afastar doenças em fase inicial do diagnóstico Confirmar um diagnóstico sugerido por outros dados Obs: os testes sensíveis também são úteis no rastreamento (screening)

Ponto de Corte (Cut-off) Normalmente, existe uma sobreposição parcial entre os resultados obtidos em pacientes positivos e negativos em testes quantitativos. A escolha do ponto de corte é essencial para definição da sensibilidade e especificidade a) Se a principal preocupação é evitar resultado falso-positivo (o resultado do teste pode indicar um tratamento arriscado para o paciente), então o ponto de corte deve objetivar o máximo de especificidade. b) Se a preocupação maior é evitar resultado falso-negativo (um doente fica sem tratamento), então o ponto de corte deve objetivar o máximo de sensibilidade.

Teste sem sobreposição

Teste com sobreposição

ELISA

Western blot Bandas no Western blot indicam contra que proteínas existem anticorpos no soro testado

Aglutinação Latex Partícula latex Antígenos

positive: agglutination Anticorpos ligam ao antígeno adsorvido no látex

Imunocromatografia ou teste de migração lateral 4/25/2017 Imunocromatografia ou teste de migração lateral Capillary flow (also known as lateral flow or immunoconcentration) devices resemble dipsticks. All of the necessary reagents are usually incorporated into the strip. Specimen (and sometimes buffer) added to the strip flows across the reagents, and a colored line develops in the presence of antibody. Most lateral flow devices also have a control line that detects IgG antibody. This internal control serves to tell whether the test has been done correctly, and whether sufficient specimen was added to the strip. If no IgG antibody is present, the control stripe does not develop telling you the test is invalid. Rapid Tests for HIV

Princípio: migração lateral Amostra Do soro Linha do Controle Linha do Teste Conjugado IgG anticorpos Antígeno conjugado a ouro coloidal Antígeno Anticorpo anti-IgG

•Amostra migra através da membrana e anticorpos (se presentes) ligam-se ao antígeno-conjugado formando uma banda visível

Positivo Negativo (linha controle) Leitura