Imunoexpressão dos genes MLH1, MSH2, MSH6, PMS1, PMS2 e MSH3 no carcinoma colorretal em doentes com até 50 anos de idade OrientaNdo: Luiz Guilherme Lisboa Gomes Orientador: Dr. Jaques Waisberg

Introdução Carcinoma de colorretal (CCR)  intestino grosso Incidência 3ª causa de morte por câncer no mundo Genética 20 a 25% dos acometidos: casos familiares Hereditariedade 5 a 10% dos casos Síndrome de Lynch ou Carcinoma Colorretal não Polipoide Hereditário (HNPCC)

Introdução Síndrome de Lynch CCR antes dos 50 anos de idade Estádio clinicopatológico mais avançado que o esporádico Menor agressividade que o câncer esporádico Acometimento de outros órgãos  endométrio, estômago, ovários, SNC, pelve renal, vias biliares e intestino delgado Mais frequente no colo direito Diagnóstico Critérios de Amsterdam I e II Critérios de Bethesda I e II

Introdução Relação com mutações no sistema de genes de reparo Mismatch Repair (MMR)  MLH1, MSH2, MSH6, PMS2 e PMS1 Mutação MSH3  encontrada geralmente na SL 2002  Análise da instabilidade de microssatélites ou da expressão imuno- histoquímica (IHQ) das proteínas que compõem o sistema MMR  sequenciamento genético e rastreamento dos casos suspeitos de HNPCC Relação entre as mutações e as manifestações clinicopatológicas: não completamente esclarecida

Objetivos Verificar a expressão das proteínas dos genes MLH1, MSH2, MSH6, PMS1, PMS2 e MSH3, do sistema MMR de reparo de DNA, em doentes com até 50 anos de idade e submetidos à ressecção de CCR  ensaios imuno-histoquímicos Correlacionar os resultados com os dados clinicopatológicos do CCR e o diagnóstico da SL realizado pelos critérios de Amsterdam II

Método Aprovação do Comitê de Ética em Pesquisa do IAMSPE Levantamento dos casos: Serviço de Anatomia Patológica do HSPE Período: 2006 a 2010 Critérios de Inclusão Adultos acometidos por CCR e operados no Departamento de Cirurgia do HSPE < 50 anos (diagnóstico) Comprovação histológica de CCR Blocos de parafina em bom estado de conservação Critérios de Exclusão Polipose adenomatosa familiar Neoplasia não carcinoma Doença inflamatória intestinal Revisão de Prontuário + Contato Telefônico Antecedentes neoplásicos e outras informações

Método 48 Doentes Amostras 25 (52%) homens/ 23 (48%) mulheres Média de idade: 44,02±6,27 anos (27 a 50 anos) Local de acometimento: 21 (44%) colo esquerdo 18 (37%) reto 9 (19%) colo direito Amostras Laboratório de Patologia Experimental da FMABC Revisão da lâmina por patologista  confirmação Realizada IHQ em todas as amostras teciduais

Método 2 Grupos Comparação dos grupos Grupo 1  Doentes que não expressaram proteína de pelo menos um dos genes associados à SL (MLH1, MSH2, MSH6, PMS1, PMS2) Grupo 2  Doentes que não expressaram a proteína do gene MSH3 Comparação dos grupos Aspectos clinicopatológicos Antecedentes  idade, gênero, neoplasia prévia, neoplasia em familiares, localização , grau de infiltrado inflamatório peritumoral, intensidade da reação desmoplásica, diferenciação tumoral, infiltração venosa, linfática e perineural e estadiamento (TNM de 2010)

Método Doentes enquadrados nos critérios de Bethesda II  < 50 anos Critérios de Amsterdam II  diagnóstico clínico de SL Critérios de Amsterdam II 1 – Pelo menos 3 parentes com neoplasias características de SL 2 – Um dos indivíduos com qualquer neoplasia da SL deve ser parente de 1º grau dos outros dois 3 – Duas gerações sucessivas afetadas 4 – Um dos casos de neoplasia da SL com diagnóstico antes dos 50 anos de idade 5 – Excluir polipose adenomatosa familiar (PAF)

Método IHQ: anticorpos primários monoclonais Resultado positivo  deposição de produto cromógeno Resultado negativo  sem imunomarcação Variáveis clinicopatológicas Localização do CCR no intestino grosso Grau de diferenciação tumoral Presença de infiltração venosa, perineural e linfática Estadiamento da neoplasia Infiltrado inflamatório Reação desmoplásica peritumoral

Resultados MLH1, MSH2, MSH6, PMS1 e PMS2 MSH3 n (48) % p Idade 0,28   MLH1, MSH2, MSH6, PMS1 e PMS2 MSH3 n (48) % p Idade 0,28 0,04* < 47 anos 25 52,1 ≥ 47 anos 23 47,9 Sexo 0,42 0,47 Masculino Feminino Neoplasia prévia 1,00 0,34 Não 46 95,8 Sim 2 4,2 Neoplasia em familiares 0,24 30 63,8 17 36,2 Total 48 100,0 Tabela 1 - Dados clínicos resultados da ausência de imunoexpressão das proteínas MLH1, MSH2, MSH6, PMS1 e PMS2 e da proteína MSH3 em doentes operados por carcinoma colorretal e idade até 50 anos.

Moderadamente diferenciado    n MLH1,MSH2,MS6, PMS1 e PMS2  MSH3 n % p Local do tumor 0,76 0,49 Colo esquerdo 21 43,7 Colo direito 9 18,8 Reto 18 37,5 Infiltrado inflamatório 0,63 1,00 Ausente/leve 38 79,2 Moderado/intenso 10 20,8 Reação desmoplásica 0,66 Ausente 37 77,1 Presente 11 22,9 Diferenciação tumoral 0,45 0,39 Bem diferenciado 4 8,3 Moderadamente diferenciado 41 85,4 Indiferenciado 3 6,3 Infiltração venosa 0,42 36 75,0 12 25,0 Infiltração perineural Infiltração linfática 0,41 35 72,9 13 27,1 Estádio (TNM) 0,77 I II 16 33,3 III IV Total 48 100,0 Resultados

Resultados Dados clinicopatológicos dos doentes operados por carcinoma colorretal com ausência de imunoexpressão das proteínas MLH1, MSH6, PMS1, PMS2 e MSH3. Proteína n Antecedentes pessoais Antecedentes familiares Localização Estádio Gênero   Colo D Colo E Reto Homens Mulheres MLH1 2 Ausente 1 - 2 - 1 II 1 III MSH6 1 I 1 II PMS1 1 - 1 - PMS2 3 2 1 - 2 II 1IV MSH3 9 Presente 3 4 2 1 I 4 II 1 III 3 IV 6

Resultados A prevalência da ausência de imunoexpressão do gene MSH3 no grupo com idade igual ou superior a 47 anos  6,5x grupo com <47 anos Associação entre idade e alterações da imunoexpressão (p=0,04) Concordância entre IHQ e CA II Valor preditivo negativo  85% (MLH1, MSH2, MSH6, PMS1 e PMS2) ou 80% (MSH3)

Conclusões Não foi encontrada associação entre a ausência de expressão imuno- histoquímica das proteínas dos genes de reparo de DNA (Mismatch Repair - MMR) e o diagnóstico clínico pelos critérios de Amsterdam II da síndrome de Lynch Em doentes com carcinoma colorretal e com idade até 50 anos, a realização de estudo da expressão imuno-histoquímica das proteínas do sistema MMR (MLH1, MSH2, MSH6, PMS1, PMS2 e MSH3) pode servir como auxílio para aumentar a identificação de doentes suspeitos para síndrome de Lynch